琼脂糖电泳有何优缺点?

Question

琼脂糖电泳有何优缺点?

Answer 1

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法.对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离.
　　琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.
琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂（agar）是一种多聚糖,主要由琼脂糖（agarose,约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成.琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果.因此,目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下.
（1）琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事先处理就可以进行电泳.
（2）琼脂糖凝胶结构均匀,含水量大（约占98%~99%）,近似自由电泳,样品扩散较自由电流,对样品吸附极微,因此电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好.
（3）琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定.
（4）电泳后区带易染色,样品极易洗脱,便于定量测定.制成干膜可长期保存.
目前,常用琼脂糖作为电泳支持物,分离蛋白质和同工酶.将琼脂糖电泳与免疫化学相结合,发展成免疫电泳技术,能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系,由于建立了超微量技术,0.1ug蛋白质就可检出.
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸,如DNA鉴定,DNA限制性内切核酸酶图谱制作等.由于这种方法操作方便,设备简单,需样品量少,分辨能力高,已成为基因工程研究中常用实验方法之一.