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下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究,请协助完成有关问题:材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等.化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠

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下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究,请协助完成有关问题:
材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等.
化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂(与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH42SO4溶液、生理盐水等.
实验步骤:
作业搜
(1)样品获取:向新鲜猪血中加入___,静置一段时间后取上层___.
(2)盐析法粗提蛋白质:
①向血浆中加入一定体积的饱和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的浓度达到50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物.
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的浓度达到33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物.
③重复步骤①、②2~3次,最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品.
盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是___,重复步骤①、②的主要目的是___.
(3)透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH为7.4的缓冲液作透析液,每隔4h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+的量.利用缓冲液作透析液的目的是___.检测中,若观察到透析液___时,即可终止透析.
(4)凝胶色谱法分离:透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆某白蛋白样品.
(5)分子量测定:化学物质SDS能使蛋白质变性,解聚成单条肽链.在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS,电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小.如图为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果.根据电泳结果,某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论,这种说法可靠吗?理由是___.
▼优质解答
答案和解析
实验步骤:
(1)样品获取:向新鲜猪血中加入(适量的)柠檬酸钠以防止血液凝固,静置一段时间后取上层血浆.
(2)盐析法粗提蛋白质:
分析实验步骤可知,盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是该血浆白蛋白在50%和33%的(NH42SO4溶液中溶解度低,重复步骤①、②的主要目的是除去更多的杂蛋白.
(3)利用缓冲液作透析液的目的是维持pH值的相对稳定,防止pH变化对蛋白质结构造成破坏.检测中,若观察到透析液不出现黄色或红棕色沉淀时,说明小分子血浆蛋白已去除干净,即可终止透析.
(5)不可靠,由图可知,只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链,而不一定是只有两条.
故答案为:
(1)(适量的)柠檬酸钠     血浆
(2)该血浆白蛋白在50%和33%的(NH42SO4溶液中溶解度低    除去更多的杂蛋白
(3)防止pH变化对蛋白质结构造成破坏   不出现黄色或红棕色沉淀
(5)不可靠,只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链,不一定是两条
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