Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：（1）在培养上皮细胞时应将其置于含的混合气体的培

Question

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）在培养上皮细胞时应将其置于含___的混合气体的培养箱中进行培养．
（2）步骤②中应将上皮细胞与___细胞通过核移植技术构建出重组细胞．
（3）图中的ES细胞来源于___．
（4）该治疗需要利用PCR技术扩增出大量的Rag₂基因，假设Rag₂基因的两条链的引物分别称为引物A和引物B，那么1个Rag₂基因通过PCR技术扩增四轮之后，产物中含有引物A的DNA片段所占的比例理论上为___．某同学设计的一组引物的部分碱基序列为：引物A为…CAGGCT…，引物B为…AGCCTG…，请问这组引物的不合理之处是___．
（5）步骤④的培养基中应加入___以诱导ES细胞的分化．

Answer 1

（1）动物细胞培养时，在培养上皮细胞时应将其置于含95%空气加5%CO₂的混合气体的培养箱中进行培养．
（2）核移植的受体细胞是去核的（MⅡ期的）卵母细胞．
（3）据图可知，图中的ES细胞来源于（囊胚的）内细胞团．
（4）由原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第二轮中含引物A的比例为(3)/(4)，第三轮中占(7)/(8)，第四轮循环共产生16个DNA分子，其中含有引物A的分子是15个，占(15)/(16)．设计的引物是与相对应的模板连结合．但根据题干“引物A为…CAGGCT…，引物B为…AGCCTG…”，可以发现题干中的引物A和引物B有部分碱基会发生（局部）碱基互补配对而失效．
（5）在培养基中应加入分化诱导因子以诱导ES细胞的分化．
故答案为：
（1）95%空气加5%CO₂
（2）去核的（MⅡ期的）卵母
（3）（囊胚的）内细胞团
（4）(15)/(16)       引物A和引物B会发生（局部）碱基互补配对而失效
（5）分化诱导因子