回答有关生物工程的问题．小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现．用小鼠制备抗X病毒单克隆抗

Question

回答有关生物工程的问题．
小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现．
用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体．
（1）将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，其目的是______；乙组注射______（作对照）．
（2）为了保存有价值的杂交瘤细胞系，通常用超低温将其冻存，请分析其原因_______．
用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因．该技术的主要过程如下：
第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”．
第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neo^R基因（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如图），使该片段上的靶基因失活．

第三步：将插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造．
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到特定培养基中筛选培养．
其基本原理如下图所示：
（3）第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是______．neo^R基因不仅能使靶基因失活，还可作为______；“靶基因失活”的根本原因是______．
（4）从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有______、______等．

Answer 1

（1）实验目的是用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体，将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，获得能产生抗X病毒抗体的B淋巴细胞（浆细胞）；乙组注射 等量不含X病毒的溶液（作对照）．
（2）超低温抑制酶活性，利于保存其特性，因此用超低温冻存杂交瘤细胞．
（3）将neoR基因插入靶基因需要限制酶处理获得相同的黏性末端，再加入DNA连接酶进行连接，故使用的工具酶是基因工程中限制酶、DNA连接酶；neoR基因可作为标记基因；“靶基因失活”是因为在该DNA片段上插入neo^R基因，使得靶基因中的脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达．
（4）获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞到该细胞培育成“基因敲除”小鼠需转基因技术、动物细胞培养技术等．
故答案为：
（1）获得能产生抗X病毒抗体的B淋巴细胞（浆细胞）
等量不含X病毒的溶液
（2）超低温抑制酶活性，利于保存其特性
（3）限制酶（限制性核酸内切酶）、DNA连接酶    标记基因
靶基因中的脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达
（4）克隆技术  转基因技术（合理给分）