a-抗胰蛋白酶（ATT）是种急性时相反应蛋白，有蛋白酶抑制作用．图是将人的ATI基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产人ATT的过程图．请回答问题：（1）过程①中采集的精子要进行

Question

a-抗胰蛋白酶（ATT）是种急性时相反应蛋白，有蛋白酶抑制作用．图是将人的 ATI基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产人ATT的过程图．请回答问题：

（1）过程①中采集的精子要进行___处理，过程②得到的卵母细胞，一般要培养到___阶段才能进行体外受精
（2）过程③中构建基因表达载体需要___酶、___酶，将基因表达载体通过___法导入牛的受精卵．
（3）过程⑤早期胚胎培养过程中不仅要加入氧气维持细胞呼吸，还要提供一定浓度的___以维持培养液的pH．为让受体牛的生理状态与供体牛一致，需要对受体牛注射激素做___处理．
（4）当早期胚胎发育到___阶段时，将胚胎移入受体母牛子宫内．通过胚胎分割能提高胚胎的利用率，胚胎分割属于动物___（填“无性”或“有性”）繁殖的方法．

Answer 1

（1）过程①中采集的精子要进行获能处理，过程②得到的卵母细胞，一般要培养到减数第二次分裂中期（MⅡ中期） 阶段才能进行体外受精．
（2）构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次需要用 DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子；将基因表达载体导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（3）过程⑤早期胚胎培养过程中不仅要加入氧气维持细胞呼吸，还要提供一定浓度的CO₂以维持培养液的pH．为让受体牛的生理状态与供体牛一致，需要对受体牛注射激素做同期发情处理，保证胚胎移植入相同的生理环境．
（4）当早期胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，将胚胎移入受体母牛子宫内．通过胚胎分割能提高胚胎的利用率，胚胎分割属于动物无性繁殖的方法．
故答案为：
（1）获能    减数第二次分裂中期（MⅡ中期）   
（2）限制    DNA连接    显微注射 
（3）CO₂   同期发情 
（4）桑椹胚或囊胚  无性