一抗,二抗如何选择?假如我猪的一个抗病基因,克隆后转入鸡的成纤维细胞中表达,请问用Westernblot检测的时候,用什么为一抗,什么为二抗?是怎么选择的呢?假如我再换个鼠的细胞,抗体是不是应

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一抗,二抗如何选择?
假如我猪的一个抗病基因,克隆后转入鸡的成纤维细胞中表达,请问用Western blot检测的时候,用什么为一抗,什么为二抗?是怎么选择的呢?假如我再换个鼠的细胞,抗体是不是应该变了呢?

▼优质解答

答案和解析

虽然是鸡的细胞,但根据中心法则知道,蛋白质的序列信息来自于基因,而你要看的这个基因是猪的序列,所以蛋白质也是猪的序列,因此要使用抗猪的一抗,譬如鼠抗猪,或兔抗猪等等,而二抗则要根据一抗进行选择,一抗用了鼠抗,那么尔康就要用抗鼠的,譬如羊抗鼠；一抗用了兔抗,二抗就要用抗兔的,譬如羊抗兔,而二抗一般都有商品化的试剂,都是IgG,结合的是一抗的Fc段,在购买时必须看清楚是secondary antibody.你明白了么?

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