（2012•长宁区一模）回答有关生物工程的问题．小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现．用小鼠

Question

（2012•长宁区一模）回答有关生物工程的问题．
小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现．用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体．
（1）将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，其目的是______；乙组注射______．
（2）一段时间后，取甲组小鼠脾脏中的相应细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，细胞融合的结构特点是______．融合形成的杂交瘤细胞特点是______．
（3）为了保存有价值的杂交瘤细胞系，通常用超低温将其冻存，请分析其原因______．
用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因．该技术的主要过程如下：
第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”．
第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neo^R基因（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如图），使该片段上的靶基因失活．
第三步：将插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造．
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到特定培养基中筛选培养．
其基本原理如图所示：

（4）第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是______．neo^R基因不仅能使靶基因失活，还是______；“靶基因失活”的含义是______．
（5）从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有______、______等．
（6）科学家可以通过“基因敲除”来研究基因的功能，63题中获得的基因敲除小鼠，能否直接用来研究基因功能并说明原因______．

Answer 1

（1）制备单克隆抗体，需对杂交瘤细胞进行筛选，注入抗原，看是否发生凝集反应，通常实验要做对照实验实验组注入一定量的抗原，对照组注入等量不含抗原的溶液．
（2）动物细胞融合原理是细胞膜具有流动性；融合形成的杂交瘤细胞具有两个亲本的遗传特点，既能无限增殖，又能产生特异性抗体．
（3）低温保存是利用酶在低温条件下活性被抑制而不变性，利于保存其特性．
（4）把目的基因插入运载体中通常用限制酶和DNA连接酶，通常一些特殊抗性的基因作为标记基因，导入受体细胞内没有表达所需的产品，原因通常是靶基因插入neo^R基因，使得脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达．
（5）基因敲除的胚胎干细胞利用的技术有转基因技术，动物细胞培养技术，克隆技术，动物胚胎移植技术等．
（6）获得的基因敲除小鼠，体内仍有一个正常的靶基因，也能表达性状，则故不能得到靶基因的功能．
故答案为：（1）．获得能产生抗X病毒抗体的B淋巴细胞（浆细胞）    等量不含X病毒的溶液
（2）．细胞膜的流动性    既能无限增殖，又能产生特异性抗体（抗X病毒的特异性抗体）
（3）．超低温抑制酶活性，利于保存其特性
（4）．限制酶（限制性核酸内切酶）、DNA连接酶    标记基因    靶基因中的脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达
（5）．克隆技术  转基因技术（合理给分）
（6）．不能，因为该小鼠体内仍有一个正常的靶基因，也能表达性状．故不能得到靶基因的功能（2分）