回答下列有关基因工程的问题．如图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因．（1）将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X-1混合

Question

回答下列有关基因工程的问题．
如图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Ap^r表示抗青霉素的抗性基因，Tc^r表示抗四环素的抗性基因．

（1）将两端用E1切开的Tc^r基因与用E1切开的质粒X-1混合连接，连接后获得的质粒类型有______．（可多选）
A．X-1       B．X-2       C．X-3       D．X-4
（2）若将上图所示X-1、X-2、X-3、X-4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上．在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有______、______．
（3）如果X-1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X-2（Tc^r基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为______对碱基．
（4）若将外源的Tc^r基因两端用E2切开，再与用E2切开的X-1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X-4的细胞数与含X-1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？______．原因是______．

Answer 1

（1）因目的基因和质粒都是用E1切开且质粒上有两个E1酶切位点，故Ap^r基因和Tc^r基因的黏性末端相同，既可能出现Ap^r基因和X-1连接的产物（X-1），也可能出现Tc^r基因和X-1连接的产物（X-2），还可能出现X-1两端连接形成的产物（X-3）．
（2）X-1含有Ap^r基因，该基因表达后对青霉素有抗性，X-2含有Tc^r基因，该基因表达后对四环素有抗性，X-3不含抗性基因，X-4同时含有Ap^r和Tc^r基因，Ap^r和Tc^r基因表达后，对青霉素、四环素都有抗性．故而在含有青霉素或四环素的两种培养基上不能生长的大肠杆菌中不含X-1、X-2、X-4，即无质粒细胞和含X-3的细胞．
（3）用E1酶切X-1，产生850对碱基的Ap^r基因大部分碱基片段和3550对碱基含有E2酶切位点的片段．与Tc^r基因形成含有4750个碱基对的X-2质粒．用E2酶切割质粒，由环状变为链状，碱基对数不变．
（4）含X-4的细胞数与含X-1的细胞数的比值与形成这两种质粒的数量有关．这两种质粒的形成是通过末端随机结合形成碱基对，再由DNA连接酶连接缺口，而DNA连接酶对该DNA片段无选择作用，故增加DNA连接酶的用量，不改变题中的比值．
故答案为：
（1）ABC
（2）无质粒细胞   含X-3的细胞
（3）4750
（4）不能   DNA连接酶对DNA片段没有选择性或者DNA末端相同