花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥（一种绿色植物）具有黑腐病的抗性基因．用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力．再利用此原生质

Question

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥（一种绿色植物）具有黑腐病的抗性基因．用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力．再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株．流程如图．

据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是______．
（2）过程②后，在显微镜下直接观察融合的活细胞中有供体的______存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志．
（3）杂种细胞再生出______，进而形成愈伤组织．
（4）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定．如图是用该引物对双亲及再生植株1-4进行PCR扩增的结果．据图判断，再生植株1-4中一定是杂种植株的有______．

（5）对杂种植株进行______接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株．

Answer 1

（1）①表示原生质体的制备过程，该过程需用酶解法去壁，即用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁．
（2）用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中作为供体的叶肉细胞特有的结构是叶绿体，因此可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志．
（3）原生质体通过细胞壁再生形成杂种细胞，再经过脱分化过程形成愈伤组织．
（4）根据图谱，花椰菜含有碱基对为300和600的DNA片段，黑芥含有碱基对为1000、1300和1500的DNA片段，再生植株3，只含有长度为300和600的片段，与花椰菜一致，1、2、4既含有花椰菜DNA片段，又含有黑芥DNA片段，为杂种植株．
（5）本实验获得的是抗黑腐病的杂种植株，因此对杂种植株进行黑腐病菌接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株．
故答案为：
（1）纤维素酶和果胶酶
（2）叶绿体
（3）细胞壁
（4）1、2、4
（5）黑腐病菌