按照试剂盒提取的质粒,应该出现几条带啊?为什么我只有两条条带出现呢?请高手指点!谢谢!

Question

按照试剂盒提取的质粒,应该出现几条带啊?为什么我只有两条条带出现呢?请高手指点!谢谢!

Answer 1

用酚、氯仿法从工程菌中提取的质粒一般有三种构像,即超螺旋,线形和开环.（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链,因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环的质粒在最后.
判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量.因为用质粒转染真核细胞时,超螺旋的质粒效率最高,所以要求质粒中超螺旋质粒的含量要在90％以上,这也是对作为核酸疫苗重组质粒的要求.
一些经验：
1 从细菌中大量提取的质粒电泳时,不一定均出现三条带,有时会出现两条,甚至一条(一般是超螺旋的质粒),这跟上样量也有些关系.出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的.如果严格按照操作步骤,超螺旋的质粒会较多.
2 酶切将质粒线性化以后,才可以用mark判断大小.如果有三种构像,可以用中间那条带与mark比较判断大小.
3 商品化的质粒提取一般有两条带.大部分是超螺旋构像.
4 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小.