人的胰岛素基因通常从基因文库中钓取这句话哪错了?

Question

人的胰岛素基因通常从基因文库中钓取 这句话哪错了?

Answer 1

克隆的是cDNA序列.首先在人体胎盘中提取总mRNA,因为是成熟的mRNA,经过了人体自身的剪切和修饰,已经不含内含子序列了.然后体外反转录成cDNA.以后克隆和表达的都是这个cDNA序列和其编码的蛋白.基本步骤如下：
1、获取人胰岛素基因片段（获取外源基因）
有多种方法呢.鸟枪法（用一大堆限制性核酸内切酶对附近基因进行剪切,再提取所需要的.至于如何筛选,用DNA分子杂交,即DNA探针）,人工合成法（根据转录蛋白或者mRNA推导出基因序列,然后人工合成,没有内含子）,还有从基因文库中提取（也就是事先已经提取完毕的拿来用）,以及PCR扩增技术（用于大量生产该段基因片段,用于商业化运作……）
2、将获得的人胰岛素基因片段与质粒结合（与运载体结合）
先得用同样的限制性核酸内切酶处理质粒,产生和人胰岛素基因片段相同的黏性末端（也可能是平末端）,然后将两DNA分子用DNA连接酶结合在一起.关于运载体,首先需要有多处限制酶切点,然后还需要有一段标记基因,最后需要有能在受体细胞内稳定存在、自我复制并表达的能力.大肠杆菌内含质粒（独立于细菌本身的DNA,存在于细胞质内的小型环状DNA分子）,且满足以上条件.
3、将质粒导入受体细胞
即将组装好的质粒导入大肠杆菌体内.
4、检测基因是否表达
即检测是否有人的胰岛素表达出来.方法基本有三种：DNA分子杂交,RNA分子杂交,蛋白质检测（抗原抗体特异性结合）.大肠杆菌会表达稳定存在于质粒上的基因片段,依据的是中心法则：DNA——〉RNA——〉蛋白质.首先质粒上的片段解旋,RNA聚合酶嵌入启动子,然后开始合成mRNA,直到终止子.接下来运输至核糖体,有tRNA附带氨基酸随之而来,依据密码子（mRNA上）和反密码子（tRNA上）配对,固定下指定的氨基酸片段,然后脱水缩合成为多肽,继续于内质网中加工成成熟的人的胰岛素蛋白.