（2014•文登市三模）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．如图为获得抗虫棉的技术流程．

Question

（2014•文登市三模）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．如图为获得抗虫棉的技术流程．请据图回答：
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、______、将目的基因导入受体细胞、______．
（2）A过程需要的酶有______和______．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用______处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为______态；然后将在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[C]______和[E]______．如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入______．
（5）目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是______．这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是______．

Answer 1

（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定．
（2）基因表达载体构建过程需要限制酶和DNA连接酶．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺感受处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为重组质粒和感受细胞态；然后将在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，离体棉花叶片组织必须通过植物的组织培养技术培养成再生植株，该过程需要要经过[C]脱分化和[E]再分化．如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C脱分化过程的培养基中加入卡那霉素，进行筛选．
（5）目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上．这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是DNA分子杂交技术．
故答案为：
（1）基因表达载体构建  目的基因的检测与鉴定
（2）限制酶     DNA连接酶 
（3）Ca²⁺感受  重组质粒和感受细胞
（4）脱分化  再分化 卡那霉素 
（5）目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上      DNA分子杂交技术