考马斯亮蓝G-250配制时先加水後加磷酸有无影响今天配的考蓝有问题，测得的蛋白含量明显偏低。有一个问题是在配制时是先取0.5gG-250溶於50mL95%的乙醇，没加磷酸的情况下就加了水，然後才

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考马斯亮蓝G-250配制时先加水後加磷酸有无影响
今天配的考蓝有问题，测得的蛋白含量明显偏低。有一个问题是在配制时是先取0.5gG-250溶於50mL95%的乙醇，没加磷酸的情况下就加了水，然後才加入磷酸的。这对於考蓝染料有无影响吖？

▼优质解答

答案和解析

肯定有影响呀,而且你这个配方有问题,我们操作的是,100mg的考马斯亮蓝G250溶于50mL95%的乙醇,最好边搅拌边加入85%的磷酸100ML,继续搅拌,溶液变为红棕色,因为考马斯亮蓝的磷酸盐溶液是棕红色的.如果你们先加水再加磷酸,生成考马斯亮蓝的磷酸盐的量会因为溶度被稀释而大大减少,降上述操作得到的母液稀释到1升,稀释后的溶液一定要用双层滤纸过滤,滤液呈棕色,且无悬浮物.一定要过滤,因为稀释后会产生蓝色的悬浮物,另外,你们工作液的浓度很重要,吸光度在0.0.8之间为宜,因为太高或太低都不符合BEER定律,我们可以做出0.999的标准曲线,

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