Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的．（2）

Question

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的___．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到___期时，可从其___分离出ES细胞．
（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag₂的表达载体．可以根据基因Rag₂的___设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___酶的酶切位点．
（4）步骤④在特定的诱导下ES细胞成功分化为造血干细胞其原因是___的结果．
（5）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的___，用Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．

Answer 1

（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；可以根据基因Rag₂的核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有Hindlll和Pst I酶的酶切位点．
（4）步骤④在特定的诱导下ES细胞成功分化为造血干细胞，而分化的实质是基因的选择性表达．
（5）为检测Rag₂基因是否表达，可以采用抗原-抗体（Rag₂蛋白）杂交法．
故答案为：
（1）细胞核
（2）囊胚 内细胞团
（3）核苷酸序列   Hindlll和Pst I
（4）选择性表达
（5）蛋白质