我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质．图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答：（1

Question

我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质．图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答：

（1）铁结合蛋白基因来自菜豆，且基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用______法获得此目的基因或用______扩增目的基因．
（2）构建重组Ti质粒时，通常要用______分别切割______．将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用______处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入．
（3）将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得______；培养基3与培养基2的区别是______．检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻______．
（4）为研究外源基因的遗传方式，将To代植株上收获的种子种植成T1代株系，检测各单株的潮霉素抗性．在检测的多数T1代株系内，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，此结果说明外源基因的遗传符合______．有少数T1代株系的所有植株都表现为对潮霉素敏感，但其体内能检测到铁结合蛋白基因，造成这一结果最可能的原因是______．

Answer 1

（l）获取目的基因的方法有三种：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成）．如果基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用化学合成法获得此目的基因，再用PCR技术进行扩增．
（2）构建重组质粒的过程中，通常要用同一种限制酶分别切割质粒和含目的基因的DNA片段，使它们产生相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接成重组质粒．将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用CaCl₂溶液处理农杆菌成为感受态细胞，易于重组Ti质粒导入．
（3）质粒上的标记基因为潮霉素抗性基因，因此通过培养基2的筛选培养，可以获得含有重组质粒的愈伤组织．培养基3与培养基2的区别是生长素和细胞分裂素的浓度比例不同．检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻成熟种子中铁含量．
（4）细胞导入目的基因后，可将该细胞认为是携带目的基因的杂合子，自交后代中，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，此结果说明外源基因的遗传符合基因的分离定律．如果体内能检测到铁结合蛋白基因，而表现为对潮霉素敏感，最有可能的就是潮霉素抗性基因没有表达或者潮霉素抗性基因丢失．
故答案为：（1）化学合成  PCR   
（2）限制性核酸内切酶     含目的基因的DNA片段和质粒  CaCL₂  
（3）含有重组质粒（有潮霉素抗性）的愈伤组织    生长素和细胞分裂素的浓度比例  成熟种子中铁含量   
（4）基因分离   潮霉素抗性基因没有表达（或“潮霉素抗性基因丢失”）