合成的引物怎么溶解

Question

合成的引物怎么溶解

Answer 1

◆干粉引物溶解稀释方法：
收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失.引物保存在高浓度的状况下比较稳定.如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融.引物一般配制成10-100pmol/uL(umol/L).
引物管上标有1OD 相当于多少umol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算：
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量（ul）=1OD相当于umol 数×10000
例如,您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035umol ,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为10umol/L,那么只需用350ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可.
◆液体引物再稀释可用下列公式：
稀释引物要达到的浓度（pmol/ul）＝母液浓度（pmol/ul）×汲取母液的体积（ul）÷（汲取母液的体积（ul）＋加水量（ul））
引物一般来的时候是干粉.这种状态能保存最长的时间.
如果用的话要先离心,5分钟（12000转）.然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其实就是tris盐酸和EDTA的混合液.理论上用TE保存好,不容易降解.
一般配的时候要先配成储存液（浓度是100umol/L）,在配成使用液（浓度是10umol/L）.这样的好处是引物不容易降解.
引物忌讳反复冻溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就应该分装.使用液放在4度（2/3个月没问题的）,储存液放在-20度.
引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/L,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100uM的,有的习惯于稀释成20uM,也有的稀释成10uM的.建议稀释成20uM的浓度,因为如果你稀释成100uM,当你所做PCR的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差；如果是稀释成10uM,引物浓度过低,容易降解.不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解.