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怎样得到一种基因的cDNA,
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怎样得到一种基因的cDNA,
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答案和解析
1.首先,你要知道那种细胞有该基因的高表达.
2.培养该细胞.
3.提取总的mRNA.
4.下面的步骤取决于你对该基因序列的知道情况.如果全序列已知,那就设计一对针对首尾的PCR引物,直接做RT-PCR,就可以得到全长cDNA了.如果只知道其中一段,那就先把mRNA用随机引物反转录为cDNA,建立cDNA文库.然后用已知的序列设计探针,在文库中寻找
2.培养该细胞.
3.提取总的mRNA.
4.下面的步骤取决于你对该基因序列的知道情况.如果全序列已知,那就设计一对针对首尾的PCR引物,直接做RT-PCR,就可以得到全长cDNA了.如果只知道其中一段,那就先把mRNA用随机引物反转录为cDNA,建立cDNA文库.然后用已知的序列设计探针,在文库中寻找
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