自然分离的目的是什么,自然分离的方法有哪几种,简要说明其操作过程

Question

自然分离的目的是什么,自然分离的方法有哪几种,简要说明其操作过程

Answer 1

自然分离的目的是将自然界混杂在一起的微生物分离开来,以便观察、研究和利用某一种微生物.其方法主要包括连续稀释分离法,平板划线分离法和单细胞分离法等.
1.连续稀释分离法
①取1克土样,在火焰旁放入装有99毫克无菌水的锥形瓶内,充分摇匀,将菌分散.
②用移液管吸取上述菌悬液1毫升,放入盛有9毫升无菌水的试管中,并进一步稀释成1000倍,即10-3的菌悬液.按10倍稀释法连续稀释到10-8（每1次稀释,都须更换移液管）.
③取3支1毫升移液管分别从10-8、10-7、10-6菌悬液中吸取1毫升菌悬液,分别注入编号10-8、10-7和10-6的培养皿内,同一稀释液重复做3个培养皿.
④将温度为45～50℃的营养琼脂培养基（其成分和配制方法见本章第三节）倒入上述各培养皿内,轻轻旋转使菌悬液充分混合均匀,凝固后,将培养皿倒扣放置在温暖处（28℃左右）,每天观察培养基表面有无微生物菌落.
⑤经过一定时间培养后,培养基上长出菌落,根据菌落特征,初步判断属于何种类型的微生物,并在显微镜下检查,若菌体形态一致,则可认为是初步分离到纯菌种.
⑥将分离培养所得的纯菌种,从平板培养基转移到试管斜面培养基上培养.
2.平板划线分离法
①取1克土样,在火焰旁加进装有99毫升无菌水的锥形瓶中,堵塞棉塞,制成菌悬液待用.
②取一培养皿置于实验台上,左手将培养皿打开稍许,向培养皿内注入熔化的营养固体培养基10～12毫升,轻轻转动培养皿,使其中的培养基分布均匀,平放桌上,使其凝成平板.然后在皿底用蜡笔划分A、B、C、D几个区.应连续制作几份平板培养基.
③将培养皿底部用姆指和无名指固定成倾斜状态,在火焰旁将培养皿稍微打开.在此同时,用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液,迅速送入培养皿内,在平板培养基的一边,作第1次平行划线 7条,转动培养皿约70°角,用烧过冷却的接种针,通过第1次划线部分作第2次平行划线,然后再用同样方法,作第3次平行划线.划线时,应使平板培养基表面向下,以免空气中杂菌落入.接种针应与平板表面成30°角左右.不要使接种针碰到培养皿边缘,也不要将培养基划破.
④将划线后的培养皿倒放在28℃左右的温暖处进行培养,待长出菌落后,鉴定微生物类群,并根据镜检结果,判断是否已分离到了纯菌种.如果菌种很纯,则可转移到斜面培养基上进一步培养.
连续稀释分离法和平板划线法,均须在无菌室或接种箱内进行.