为什么删选含有目的基因的受体时,只要质粒上含有抗生素基因就能在抗生素培养液中生存,如果没表达呢

Question

为什么删选含有目的基因的受体时,只要质粒上含有抗生素基因就能在抗生素培养液中生存,如果没表达呢

Answer 1

首先我说一下,质粒上并不是“抗生素基因”,而是“抗抗生素基因”,此种基因编码一些专一性的酶催化抗生素分解,比如抗青霉素的酶就是“贝塔内酰胺酶”,催化青霉素的内酰胺环开环.所以只要菌体内有这种带上了抗抗生素基因的质粒,菌就可以抵抗抗生素对它的毒杀作用,就可以生存.我们是将目的基因在质粒的多克隆位点（MCS）处连接,成为重组质粒,质粒上要有相应的标记基因以方便筛选转化子,一般就是用抗生素抗性基因,在含有抗生素的选择培养基中培养菌体就可筛选出成功导入质粒的菌落.当然了,也不排除导入的质粒是空质粒,就是说目的基因没有成功结合上去.所以这时候我们要对抗生素培养基中的菌落进行进一步的检查,剔除假阳性——空质粒的转化子!常用方法有二：1. 目的基因的序列是已知的,对目的基因设计引物进行PCR,之后通过琼脂糖凝胶电泳看有无特异条带,没有就说明是空质粒；2.对目的基因的表达产物进行测定,我们可以做Western Blot,之后通过ELISA显色反应.其他的方法还有很多,我只是说了最简单的和常用的方法,回答完毕,谢谢!